色譜柱使用
來源： 日期：2016-08-24
1. 色譜柱各部分名稱
2. 色譜柱的安裝
1) 請將液相色譜裝置中的流動相完全置換后再連接色譜柱。并且請完全排出流路內的空氣。
|
注意 |
裝置內的液體和所使用的流動相不能相溶的情況下，請使用雙方都能相溶的液體做過渡。比如從水置換到氯仿的情況，就需要使用丙酮做過渡，才能完全置換。 |
|
注意 |
將鹽溶液置換成有機溶劑的時候，需要通過純水、丙酮的順序來進行置換。相反，從有機溶劑轉換成鹽溶液的情況下，需要通過丙酮、純水的順序置換。 |
|
注意 |
不僅僅是泵，流動相流動的所有流路都必須進行置換。例如，注入樣品的情況，軟管內的液體也需要置換。另外，如果使用壓力計等別的軟管的情況，取下來的管子也必須由流動相洗凈后才能繼續使用。 |
2) 色譜柱保存方法不對或者長期不使用的情況下，色譜柱的出入口可能會有空氣殘留。這種情況下，必須先把空氣完全排出后才連接到裝置中。
|
注意 |
請避免快速加熱，并且注意加熱溫度不要超過色譜柱的最高負荷溫度。 |
|
參考 |
把柱子入口側的螺栓打開，然后加溫(一般加溫到手心感到溫暖的程度就足夠了)，等液體滿出來以后接到裝置上。然后，打開出口處的螺栓，用泵送液，等確認出口處有液體流出后，連接到裝置中。這樣操作，就算后面再連接一根色譜柱也能完全除去空氣。 |
3) 請在泵運作的時候連接色譜柱。確保能讓流動相按照色譜柱上箭頭的方向流動的狀態連接色譜柱。
4) 色譜柱加溫使用的時候，先用0.2～0.3mL/min的低流量一邊送液一邊升溫。達到所定溫度后，再漸漸的增加流量至測定流量。
5) 色譜柱需要安定時間。連接到裝置中立即進行測試的情況下，第一次很難得到好的分析結果。
3. 色譜柱的取下和保存
1) 色譜柱加熱使用的情況下，先把流量下降到0.2～0.3mL/min，然后，繼續送液的同時慢慢的把色譜柱溫度降低到室溫。
2) 色譜柱溫度降低到室溫后，先停止泵，再把色譜柱從裝置中取下，擰緊兩端的螺栓。
|
注意 |
色譜柱購入時的封入液和流動相不同的情況，先用封入液置換，再取下色譜柱。 |
|
注意 |
為了不漏液，請擰緊色譜柱兩端的螺栓。 |
|
參考 |
室溫是指保管色譜柱的場所的溫度。 |
3) 色譜柱請放置于購入時的包裝盒內，放在溫度變化少的地方(恒溫室最適合)進行保存。
4) GPC、GFC色譜柱長時間保存的情況下，推薦使用液浸保存的方法。這種情況，把色譜柱的出口端從裝置上取下，連接上外徑1/16英寸、內徑0.8mm、長50cm的特氟龍軟管。然后啟動泵，特氟龍軟管的前端有流動相流出后停止泵，把特氟龍管的前端浸入含有80ml浸入液的容積為100ml的瓶中。把色譜柱的入口端從裝置上取下，擰緊螺帽放置在溫度變化少的地方保存。
適合使用液浸法保存的色譜柱以及其適合的浸入液如下。
①浸入液使用甲苯的色譜柱
GPC KF、K、KD、AT、HT、UT、HFIP系列
②浸入液使用純水(含有疊氮化鈉作為防腐劑)的色譜柱
OHpak SB-800 HQ、PROTEIN KW系列
|
參考 |
液浸保存的時候，每個月一次，色譜柱中的溶劑用新的溶劑置換一下能更長的保持色譜柱的性能。 |
5) 3天內會再次使用的情況下，不需要把色譜柱取下進行保存。
|
注意 |
容易析出的鹽溶液，腐蝕性的溶劑作為流動相的情況下，除了1天以內保存的情況外，都需要用流動相把鹽溶液和腐蝕性溶劑置換后保存。 |
4. 使用保護柱的建議
1) 樣品中含有易于吸收填充劑的物質或者使用被污染的樣品時，色譜柱的性能可能會急劇降低。這種場合推薦使用保護柱。
|
參考 |
保護柱能長久保持分析柱的性能，但不能提高分離性能。 |
2) 保護柱應根據樣品的性狀、注入量，定期更換。
5. 樣品的前處理
1) 一般情況下樣品先用將使用的流動相溶解。
|
參考 |
使用不穩定的流動相的場合，在注入前取出流動相溶解樣品。特別是使用示差折光檢測器的時候，為了減小溶劑峰此操作非常重要。 |
|
注意 |
使用梯度法的時候，樣品要先在最初的流動相中溶解。 |
|
注意 |
樣品沒有在流動相中溶解前，請不要注入色譜柱。 |
2) 為了去除流動相中的雜質和不溶物，請使用0.5μm的過濾器過濾。
3) 使用固相提取用過濾器能達到很好的前處理效果。
6. 流動相
1) 為了去除流動相中的雜質和不溶物，請使用0.5μm的過濾器過濾。
2) 流動相請充分脫氣后使用。
流動相使用超聲波，利用抽氣泵減壓脫氣。流動相脫氣不完全就使用示差檢測器進行檢測的時候，有可能會無法得到安定的基線。使用脫氣機(氣體除去裝置)ERC-3000α系列的話能簡便脫氣的操作步驟。
|
注意 |
加溫色譜柱使用的情況，為了避免色譜柱內部和出口產生氣泡，脫氣尤其重要。 |
7. 色譜柱的檢定方法
出庫時附帶的色譜柱檢定報告的理論塔板數，是通過以下的方法求得的。
理論塔板數的測定條件請參考色譜柱的檢定條件。
圖表的繪制速度以每分鐘1.5～2.0cm為合適。調整檢測器的靈敏度使圖表上峰的高度在10cm左右。
8. 色譜柱的廢棄方法
廢棄的場合，請把色譜柱的內容物(填充劑和流動相)取出，內容物在焚燒爐中燒毀，把空的色譜柱丟棄。
|
注意 |
色譜柱受到沖擊可能會造成填充劑狀態改變從而導致色譜柱性能降低。請避免色譜柱從高處掉落。 |
|
注意 |
請不要彎曲色譜柱。 |
|
注意 |
打開色譜柱的終端部件可能會造成性能降低，絕對不要打開。 |
|
注意 |
開始啟動時和使用中，請避免急速的壓力和流量變化。為了延長色譜柱的壽命，請盡量使用配有減震器、或者沒有脈動的泵。 |
